Arcturus New Technology ArcturusXTTM VeritasTM Microdissection HistoGeneTM PicoPureTM RiboAmpTM

RNA Amplification Kit

RiboAmpTM RNA Amplification Kitはマイクロアレイ解析に十分な量が入手できないRNAサンプルの解析を可能にします。RiboAmpTMキットはわずか1ngのtotal RNAからmRNAをリニアに増幅することができる便利なキットです。独自のプロセス(特許出願中)は高い増幅効率かつ忠実なリニアリティーを以って、メッセンジャーRNAを1度の合成で最大1000倍、2回では最大1,000,000倍まで増幅します。RiboAmpTMキットは即座にマイクロアレイ用にラベリングあるいはQRT-PCRに使用できるアンチセンスRNA(aRNA)を増幅します。


RNAインプットガイドライン
増幅
回数
最低量 細胞から抽出した
Total RNA
推奨量 細胞から抽出した
Total RNA
1 500ngー2ug 2〜10ug
2 250ー500cells 500ー2000cells

・簡単なプロトコルと使用方法
・バキューム濃縮不要
・最速処理
  (ハイブリと解析により多くの時間を
    割けます)
・多数の停止ポイント
・cDNA、オリゴアレイによって
  証済みのテクノロジー
・最適なコンポーネント

工程時間
回数 RiboAmpTMKit 他社製品
1 6時間 24時間
2 15時間 48時間

一次合成酵素と試薬、二次合成酵素と試薬、cDNA精製試薬、MiraCol精製カラム
IVT酵素および試薬、ARNA精製試薬、コントロールRNA、完全ユーザーガイド


異なった段階における乳癌細胞分布の遺伝子発現比較解析
図A: 正常導管上皮および浸潤性乳管癌(IDC)のLCM前、後

図B:

正常およびIDC乳癌組織から生成されたaRNAをビオチン標識しハイブリダイズしたGeneChipョ Array(Affimetrix)イメージ

図C:

2Dクラスター解析においては正常細胞と比べた場合の癌細胞の遺伝子発現の増加と抑制が再現性を以って見ることができ、さらにはより重要な各段階における分子署名を示しています。

高収量でリニアな増幅を実現する
5ステップ

Total RNAから分離したmRNAは1本鎖合成を経て1本鎖cDNAを生成します。このcDNAをテンプレートとしてプライマーにより2重鎖DNA(dsDNA)が生成されます。dsDNAの分離後、これはテンプレートとして使われ、in vitro転写反応によって基のmRNAに相保的な配列のaRNAコピーが多数生成されます。2度目の増幅では1度目の増幅で得られたaRNAを使って同じ工程が繰り返されます。


母卵細胞と胚細胞の受精と発生における遺伝子発現比較解析

20個のマウス母卵細胞および30組の2細胞期胚からPicoPureTM RNA Isolation Kitによって分離したRNAをRiboAmpTM RNA増幅Kitによって2回増幅し、15,000 遺伝子のcDNAマイクロアレイでハイブリダイズし、受精と着床前発生に関する遺伝子を特定。

図A: マウス母卵細胞と胚細胞サンプル
図B: マイクロアレイハイブリダイゼーションイメージ

図C:

スキャッタプロット上では母卵細胞と胚細胞とでは 450以上の遺伝子が発現に差が見られました。レプリケートによるハイブリダイゼーションでは極めて 高い相関値(R=0.89)が得られ、増幅サンプルの極めて高い再現性が示されています。


マウスニューロンサブタイプ間における遺伝子発現比較解析の高い再現性

図A:

マウス脳、海馬の全く異なった2つのサブタイプCA1/CA2および前頭皮質のニューロンをLCMにより単離。RNAはPicoPureTM RNA Isolation Kitにより分離、RiboAmpTMキットにより増幅、そしてラベル後23,040遺伝子のcDNAマイクロアレイ(Agilent Technologies)にハイブリダイズしました。

図B:

マウス海馬CA1/CA2によるレプリケート実験では 蛍光シグナル強度において極めて高い相関値(R=0.997)が得られました。

図C:

マウス海馬CA1/CA2と前頭皮質の2つのニューロン サブタイプにおける遺伝子発現比較


KIT0201  RiboAmpTM RNA Amplification Kit, 10回分
KIT0205  RiboAmpTM HS RNA Amplification Kit, 5回分
KIT0206  RiboAmpTM OA RNA Amplification Kit, 20回分
KIT0207  RiboAmpTM OA RNA Amplification Kit, 60回分


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